前言

液滴微流控技術(shù)簡(jiǎn)介與觀測(cè)挑戰(zhàn)

液滴微流控技術(shù)作為一種在微尺度環(huán)境下對(duì)微量流體進(jìn)行精準(zhǔn)操控的革命性技術(shù)，近年來(lái)在生物醫(yī)學(xué)、化學(xué)合成和材料科學(xué)等領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大潛力。該技術(shù)核心在于利用互不相溶的流體在微通道中生成單分散液滴，將這些液滴作為獨(dú)立微反應(yīng)器進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)操作。液滴微流控技術(shù)憑借其微型化優(yōu)勢(shì)、高通量特性以及低試劑消耗等特點(diǎn)，迅速成為生命科學(xué)和化學(xué)分析領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

圖1.1 微流控芯片外觀

圖1.2 微流控芯片孔道形貌

1.微流控液滴觀測(cè)的技術(shù)挑戰(zhàn)

盡管液滴微流控技術(shù)優(yōu)勢(shì)顯著， 但在實(shí)際應(yīng)用中，仍面臨著嚴(yán)峻的觀測(cè)挑戰(zhàn)。這些挑戰(zhàn)主要來(lái)源于液滴的微尺度特性和高速動(dòng)態(tài)過(guò)程。具體而言：

時(shí)空分辨率挑戰(zhàn)

在液滴微流控系統(tǒng)里，液滴尺寸往往僅有微米級(jí)。不僅如此，液滴的生成、運(yùn)動(dòng)及轉(zhuǎn)化過(guò)程堪稱(chēng)瞬息萬(wàn)變。一般情況下，液滴的生成頻率就能達(dá)到每秒幾十到幾百個(gè)，而高分選系統(tǒng)操作頻率甚至能飆升至每秒上千次。如此超高速的動(dòng)態(tài)變化，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了常規(guī)觀測(cè)設(shè)備的捕捉極限。這就使得研究人員透過(guò)觀測(cè)設(shè)備，看到的不過(guò)是一連串模糊不清的影像，或是連成一片的線條，根本無(wú)法清晰地捕捉到液滴形成與運(yùn)動(dòng)的具體細(xì)節(jié)。

由于微流控芯片通常具有多層結(jié)構(gòu)且液滴在微通道中處于連續(xù)流動(dòng)狀態(tài)，傳統(tǒng)顯微成像技術(shù)受對(duì)焦深度、光照均勻性和分辨率等因素影響，難以對(duì)這一過(guò)程進(jìn)行全流程的清晰觀測(cè)。難以實(shí)現(xiàn)全流程清晰觀測(cè)。而液滴內(nèi)部發(fā)生的生物或化學(xué)變化往往需要高清晰度、高對(duì)比度的圖像才能進(jìn)行準(zhǔn)確分析。

面對(duì)這些技術(shù)瓶頸，倒置透射顯微鏡與高速相機(jī)成像系統(tǒng)的聯(lián)用，成為液滴微流控研究中至關(guān)重要的觀測(cè)方式，為科研人員洞察微流控領(lǐng)域的奧秘，打開(kāi)了一扇關(guān)鍵窗口。

2.微流控觀測(cè)系統(tǒng)組成與工作原理

在液滴微流控研究領(lǐng)域，倒置透射顯微鏡與高速相機(jī)系統(tǒng)的精妙組合，構(gòu)建起一個(gè)多組件高度集成的前沿技術(shù)平臺(tái)。該系統(tǒng)能夠?qū)崟r(shí)捕捉并精準(zhǔn)解析微流控芯片內(nèi)發(fā)生的各種瞬態(tài)現(xiàn)象，賦予研究人員微觀世界觀測(cè)能力。接下來(lái)，讓我們一同深入探索該系統(tǒng)的各個(gè)關(guān)鍵組成部分，揭開(kāi)其背后蘊(yùn)含的工作原理奧秘。

2.1倒置透射顯微鏡

倒置透射顯微鏡是該成像系統(tǒng)的光學(xué)核心，其獨(dú)特設(shè)計(jì)適配液滴微流控的觀測(cè)需求。與常規(guī)顯微鏡相比，倒置透射顯微鏡另辟蹊徑，采用了自上而下的光路布局。在此設(shè)計(jì)中，物鏡被安置于樣品的下方，而光源則從上方進(jìn)行照射。

這一創(chuàng)新設(shè)計(jì)帶來(lái)了諸多顯著優(yōu)勢(shì)：一方面，它為微流控芯片的上方空間留出了充足的操作區(qū)域，方便集成微流體控制單元和注射系統(tǒng)；另一方面，它能夠直接觀測(cè)微通道內(nèi)的流體行為，而無(wú)需復(fù)雜的樣品制備流程，為實(shí)驗(yàn)提供了更高的效率與便捷性。

圖3.1 光路示意圖來(lái)自徠卡顯微系統(tǒng)



圖3.2 該系統(tǒng)倒置顯微鏡型號(hào)為徠卡DMi8



圖3.3 實(shí)際測(cè)試樣品放置

如圖3.3所示，倒置式觀察為芯片的上方空間留出了充足的操作區(qū)域，同時(shí)能直接測(cè)微通道內(nèi)的液滴流體行為。

2.2高速相機(jī)系統(tǒng)

高速相機(jī)是捕捉液滴動(dòng)態(tài)過(guò)程的關(guān)鍵組件，其性能直接決定了系統(tǒng)能否有效記錄微流控中的瞬態(tài)現(xiàn)象。應(yīng)用于液滴微流控領(lǐng)域的高速相機(jī)，往往具備一系列獨(dú)特的技術(shù)特性，具體如下：

高幀率采集能力：液滴微流控過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化往往發(fā)生在毫秒甚至微秒級(jí)別的時(shí)間內(nèi)發(fā)生，因此要求相機(jī)必須具備很高的幀率。以高速攝像機(jī)為例，其幀率表現(xiàn)極為優(yōu)秀，可達(dá) 212500 幀 / 秒 。在 1024 x 1024 的分辨率下，依然能保持 4000 幀 / 秒的拍攝速度，精準(zhǔn)捕捉液滴的瞬態(tài)圖像，不錯(cuò)過(guò)任何細(xì)節(jié)。

圖4.1 實(shí)際測(cè)試效果，放大倍數(shù)100X，拍攝幀率2000fps

圖4.2 實(shí)際測(cè)試效果，放大倍數(shù)100X，拍攝幀率4000fps

2.3其他關(guān)鍵組件

完整的液滴微流控觀測(cè)系統(tǒng)除了核心組件外，還包括多個(gè)關(guān)鍵輔助組件，它們共同保障系統(tǒng)穩(wěn)定運(yùn)行并擴(kuò)展其應(yīng)用范圍：

• 精密流體控制模塊：包括壓力泵和流控儀，用于精確控制微流控芯片中各相流體的流速和壓力。

  

  圖5.1 分體式注射泵界面
  
  

• 信號(hào)同步與控制單元：負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)整個(gè)系統(tǒng)中各個(gè)組件的工作時(shí)序。在單細(xì)胞分離系統(tǒng)中，信號(hào)控制模塊接收來(lái)自圖像處理模塊的觸發(fā)信號(hào)，精確控制壓電致動(dòng)器沖擊打印室上的柔性薄膜，實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞液滴的按需噴射。

• 2.4系統(tǒng)工作流程

  倒置透射顯微鏡與高速相機(jī)系統(tǒng)相結(jié)合，應(yīng)用于液滴微流控研究時(shí)，其典型工作流程涵蓋以下幾個(gè)至關(guān)重要的步驟：

• 圖像捕獲：在壓力泵作用下，細(xì)胞懸液或反應(yīng)混合物從微通道入口輸送到出口，高速攝像機(jī)搭載倒置顯微鏡，對(duì)焦微通道中間觀測(cè)平面，以高幀速捕獲細(xì)胞或液滴的灰度圖像。

• 圖像處理：系統(tǒng)實(shí)時(shí)對(duì)捕獲圖像進(jìn)行背景提取、高斯去噪、閾值分割等處理，識(shí)別并定位目標(biāo)（如細(xì)胞或液滴）的二維位置。

• 決策與觸發(fā)：基于圖像分析結(jié)果，系統(tǒng)發(fā)送觸發(fā)信號(hào)至控制模塊，觸發(fā)執(zhí)行機(jī)構(gòu)（如壓電致動(dòng)器、分選電極等）進(jìn)行相應(yīng)操作。

• 數(shù)據(jù)記錄與分析：全過(guò)程圖像數(shù)據(jù)被同步記錄，用于后續(xù)的定量分析和過(guò)程回溯，為理解液滴動(dòng)力學(xué)行為提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

• 倒置透射顯微鏡搭配高速相機(jī)系統(tǒng)為液滴微流控研究提供了強(qiáng)大的技術(shù)平臺(tái)，使科研人員能夠深入探索微觀世界的動(dòng)態(tài)過(guò)程。這一技術(shù)組合不僅解決了液滴微流控研究中的觀測(cè)挑戰(zhàn)，還極大地促進(jìn)了單細(xì)胞分析、三維細(xì)胞培養(yǎng)、高通量篩選等多個(gè)領(lǐng)域的發(fā)展。

  隨著多模態(tài)成像、人工智能、儀器自動(dòng)化和更高時(shí)空分辨率等技術(shù)的不斷進(jìn)步，倒置透射顯微鏡與高速相機(jī)的結(jié)合將在未來(lái)生命科學(xué)研究、藥物開(kāi)發(fā)和材料合成中發(fā)揮更加重要的作用。這一技術(shù)平臺(tái)的持續(xù)演進(jìn)，將不斷拓展我們對(duì)微觀流體世界的認(rèn)知邊界，為科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用創(chuàng)造新的可能性。

  液滴微流控技術(shù)本身作為多學(xué)科交叉的前沿領(lǐng)域，其進(jìn)一步發(fā)展也離不開(kāi)光學(xué)成像技術(shù)的支持。兩者相輔相成，共同推動(dòng)著科學(xué)技術(shù)向更微觀、更高效、更精準(zhǔn)的方向邁進(jìn)。

  通過(guò)上述流程，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了從觀測(cè)到控制的閉環(huán)操作，使液滴微流控研究從被動(dòng)觀察邁向主動(dòng)操控的新階段。

  3.技術(shù)挑戰(zhàn)與解決方案

  盡管倒置透射顯微鏡搭配高速相機(jī)系統(tǒng)在液滴微流控研究中表現(xiàn)出強(qiáng)大能力，但在實(shí)際應(yīng)用中仍面臨多項(xiàng)技術(shù)挑戰(zhàn)。理解這些挑戰(zhàn)并采取相應(yīng)對(duì)策，對(duì)于優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、提高研究質(zhì)量至關(guān)重要。

  分辨率與幀速的平衡

  液滴微流控觀測(cè)中的一個(gè)核心矛盾是空間分辨率與時(shí)間分辨率之間的平衡關(guān)系。高空間分辨率需要相機(jī)在高像素條件下工作，而這通常會(huì)限制最大幀速率；反之，追求高時(shí)間分辨率（幀速）則往往需要降低圖像分辨率或縮小感興趣區(qū)域。

  解決這一矛盾需要根據(jù)具體研究目標(biāo)優(yōu)化相機(jī)設(shè)置。例如，在研究液滴內(nèi)部細(xì)胞細(xì)微結(jié)構(gòu)時(shí)，應(yīng)優(yōu)先考慮空間分辨率，確保圖像清晰度；而在分析液滴生成或融合的快速動(dòng)力學(xué)過(guò)程時(shí)，則應(yīng)優(yōu)先保證時(shí)間分辨率。高速相機(jī)在不同分辨率下支持不同幀率：1024×1024分辨率下達(dá)4000fps，而將分辨率降至384×384時(shí)，幀率可提升至21600fps。

  此外，還可以通過(guò)區(qū)域興趣（ROI）采集、像素合并等技術(shù)，在有限帶寬下實(shí)現(xiàn)更優(yōu)化的分辨率-幀速組合。這些技術(shù)使研究人員能夠根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活調(diào)整采集參數(shù)，捕捉最關(guān)鍵的數(shù)據(jù)信息。

  4.未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)

  隨著液滴微流控技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)、化學(xué)合成和材料科學(xué)等領(lǐng)域的深入應(yīng)用，倒置透射顯微鏡搭配高速相機(jī)系統(tǒng)也在不斷演進(jìn)，展現(xiàn)出明顯的發(fā)展趨勢(shì)。這些趨勢(shì)將進(jìn)一步提升系統(tǒng)的性能，拓展應(yīng)用邊界。

  多模態(tài)成像融合

  未來(lái)液滴微流控觀測(cè)系統(tǒng)將更加注重多模態(tài)成像能力的整合，即在同一個(gè)平臺(tái)上實(shí)現(xiàn)明場(chǎng)、熒光、相差等多種觀測(cè)方式。這種融合使研究人員能夠同時(shí)獲取液滴形態(tài)和內(nèi)部反應(yīng)的多種信息，提供更全面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

  倒置熒光顯微系統(tǒng)已經(jīng)支持熒光檢測(cè)定制，為多模態(tài)成像提供了可能。熒光成像能力特別重要，因?yàn)樗试S研究人員通過(guò)熒光標(biāo)記特異性追蹤液滴內(nèi)部分子過(guò)程，如基因表達(dá)、蛋白質(zhì)定位和代謝活動(dòng)。結(jié)合明場(chǎng)觀測(cè)的形態(tài)信息，可以構(gòu)建更完整的液滴內(nèi)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型。

  結(jié)語(yǔ)
  

  倒置透射顯微鏡搭配高速相機(jī)系統(tǒng)為液滴微流控研究提供了強(qiáng)大的技術(shù)平臺(tái)，使科研人員能夠深入探索微觀世界的動(dòng)態(tài)過(guò)程。這一技術(shù)組合不僅解決了液滴微流控研究中的觀測(cè)挑戰(zhàn)，還極大地促進(jìn)了單細(xì)胞分析、三維細(xì)胞培養(yǎng)、高通量篩選等多個(gè)領(lǐng)域的發(fā)展。

  隨著多模態(tài)成像、人工智能、儀器自動(dòng)化和更高時(shí)空分辨率等技術(shù)的不斷進(jìn)步，倒置透射顯微鏡與高速相機(jī)的結(jié)合將在未來(lái)生命科學(xué)研究、藥物開(kāi)發(fā)和材料合成中發(fā)揮更加重要的作用。這一技術(shù)平臺(tái)的持續(xù)演進(jìn)，將不斷拓展我們對(duì)微觀流體世界的認(rèn)知邊界，為科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用創(chuàng)造新的可能性。

  液滴微流控技術(shù)本身作為多學(xué)科交叉的前沿領(lǐng)域，其進(jìn)一步發(fā)展也離不開(kāi)光學(xué)成像技術(shù)的支持。兩者相輔相成，共同推動(dòng)著科學(xué)技術(shù)向更微觀、更高效、更精準(zhǔn)的方向邁進(jìn)。

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